黑顺片，为毛茛科植物，具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛等功效。它含有多种生物碱，包括次乌头碱、乌头碱、新乌头碱等。乌头碱对心脑血管病有很强的功效，可以使冠脉扩大，加速主动脉的血液流动速率，适当服用能推动血液循环系统，避免冠脉硬化。

黑顺片为附子炮制而成，虽然毒性有所下降，但仍具有部分毒性，如使用不当或过量，极易导致乌头碱中毒。因此，有必要采用一种有效且安全的方法对中药材中的有效成分进行含量检测。目前，我们依据中国药典2020版中的要求采用高效液相色谱法对黑顺片中的乌头碱、次乌头碱及新乌头碱含量进行测定。

色谱条件：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

色谱柱：ASC C18 MG (S-5) 4.6X250

流动相：A:乙腈-四氢呋喃(25:15)

        B:0.1mol/L 醋酸铵溶液（每1000ml 加冰醋酸0.5ml）

梯度洗脱：按照梯度洗脱表进行洗脱，检测波长为235nm。理论板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于3000。

梯度洗脱表

溶液制备:

对照品溶液的制备

取苯甲酰新乌头原碱对照品、苯甲酰乌头原碱对照品、苯甲酰次乌头原碱对照品适量，精密称定，加异丙醇-二氯甲烷（1：1）混合溶液制成每1ml各含10μg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备

取本品粉末（过三号筛）约 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氨试液 3ml，精密加入异丙醇-乙酸乙酯（1：1）混合溶液 50ml，称定重量，超声处理（功率 300W，频率 40kHz，水温在25℃以下）30分钟，放冷，再称定重量，用异丙醇-乙酸乙酯（1：1）混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液 25ml，40℃以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入异丙醇-二氯甲烷（1：1）混合溶液 3ml 溶解，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含苯甲酰新乌头原碱（C31H43NO10）、苯甲酰乌头原碱（C32H45NO10） 和苯甲酰次乌头原碱 （C31H43NO9）的总量，不得少于 0.010%。

用户实测

用户使用色谱柱ASC C18 MG (S-5) 4.6X250进行多次分析得出的谱图。

通过我们的用户实测反馈，采用ASC C18 MG (S-5) 4.6X250色谱柱可以实现黑顺片（附子）中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱含量的检测，方法准确、灵敏度高，可以满足日常分析检测的要求。

色谱柱ASC C18 MG (S-5) 4.6X250介绍：

高碳载量，分离能力更强；超纯硅胶，金属杂质含量极低，拥有更高的柱效；高比表面积，更高的载样量，适用于低浓度物质分析；自动化装填，批次重复性更佳。

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